Evaluación del efecto de 1,3-Bis-(4-fenil-[1,2,3] triazol-1-il)-2 propanol en comparación con metronidazol en cultivo in vitro de Blastocystis en muestras de pacientes con Síndroma de Intestino irritable

Abstract

Durante los últimos años, estudios realizados han descrito la asociación de este parásito con el padecimiento de Síndrome de intestino irritable (SII), el cual se define, como un grupo funcional de los desórdenes del colon con dolor abdominal, con periodos de estreñimiento con diarrea, presencia de moco y defecación irregular. El SII es una enfermedad frecuente en la práctica clínica, representa el 12% de todos los diagnósticos obtenidos en las consultas médicas generales y un 25%-50% de todas las consultas de gastroenterología. La incidencia en países en desarrollo es de 35%-43%. Así mismo se ha reportado casos clínicos donde el tratamiento con metronidazol ha sido ineficaz para la eliminación de este parásito. Por tal motivo, algunos reportes de sensibilidad in vitro realizados en Blastocystis spp., mencionan que, metronidazol no es la mejor opción para tratar la infección contra Blastocystis spp. y se debe buscar otras opciones. Por tal motivo el propósito del presente trabajo fue evaluar el efecto in vitro del compuesto 1,3-Bis-(4-fenil-[1, 2, 3] triazol-1-il)-2 propanol en comparación con metronidazol en cultivo in vitro de Blastocystis spp. en muestras de pacientes con Síndrome de intestino irritable. Para ello, se realizó un estudio prospectivo de pacientes con SII provenientes del Centro Médico ISSEMyM, durante los meses de Abril 2016-Abril 2017. Los pacientes fueron seleccionados bajo los criterios de inclusión: pacientes con SII y que aceptaron participar en el estudio; exclusión: pacientes que estuvieran con algún tratamiento antiparasitario; eliminación: pacientes que no quisieran participar en el estudio o que no presentaran SII. Los pacientes que cumplieron con los criterios de inclusión, se recibieron muestras fecales seriadas de tres, a las que, se les realizó un análisis coproparasitoscópico por observación directa y método de concentración de Ritchie. Las muestras que presentaron Blastocystis, se colocaron a una temperatura de 36°C y posteriormente se extrajo a este parásito por el método de concentración, posteriormente, se colocó al concentrado de Blastocytis en sol. de Locke a 36°C. Para la prueba de susceptibilidad, se realizó una solución Stock de metronidazol adquirido de Sigma-Aldrich y del compuesto 1,3-Bis-(4-fenil-[1,2,3] triazol-1-il)-2 propanol. las concentraciones realizadas fueron: 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 125, 250, 500 y 1000µg/mL obtenidas por dilución doble para cada compuesto. Se realizó un microcultivo en placas de 96 pozos, cada pozo se inóculo con 100µL de medio liquido de Boeck-Drbohlab con un promedio de 325 parásitos/10µL (muestra1), 312.5 parásitos/10µL (muestra 2), 150 parásitos/10µL (muestra 3), 300 parásitos/10µL (muestra 4), 212.5 parásitos/10µL (muestra 5) y 100µL de medio liquido de Boeck-Drbohlab con la concentración de cada compuesto, el análisis se realizó por triplicado y se llenó una cuarta columna con medio y misma concentración de parásitos, pero sin ningún fármaco para cada muestra, la cual fue utilizada como control, posteriormente se realizó un conteo de parásitos muertos y vivos con cámara de Neubauer en intervalos de tiempo de cada 12 horas durante 48 horas, debido a, que se observó que a intervalos de tiempo de 6hrs no había diferencias significativas en esta prueba. La viabilidad del parásito fue realizada por el método de azul tripan vistas a microscopio electrónico a objetivo de 40X. Finalmente, se obtuvo la concentración mínima inhibitoria para ambos fármacos, obteniendo como resultado que metronidazol y el bis-triazol tienen efecto en Blastocystis spp. Únicamente a concentraciones altas, sin embargo, en la muestra 1, el parásito no mostro sensibilidad ante el compuesto bis-triazol. Se concluye que, para este estudio, metronidazol es más eficaz que el compuesto con una concentración minima de 32µg/mL.