Establecimiento de cultivos in vitro de Crataegus monogyna, potencialmente productores de compuestos ansiolíticos

Abstract

La ansiedad es considerada la epidemia silenciosa del siglo XXI por ser uno de los trastornos mentales más prevalentes y con un impacto económico mundial de un billón de dólares al año. Esta enfermedad altera principalmente el neurotransmisor ácido gamma-aminobutírico (GABA), ocasionando cambios conductuales como el miedo excesivo a situaciones que no representan peligro real e impactando la salud por ser un factor de riesgo para diversos trastornos, entre ellos los cardiovasculares y gastrointestinales. Una alternativa para buscar nuevos tratamientos que disminuyan la ansiedad es la biotecnología, particularmente la biotecnología vegetal, que permite estudiar, analizar, evaluar y validar plantas y sus componentes que son utilizadas empíricamente en la medicina tradicional. Un requisito importante, en el caso de la ansiedad, es que las plantas deben contener metabolitos secundarios (MtSc) como compuestos fenólicos y flavonoides, que poseen mecanismos que son conocidos por ameliorar la sintomatología relacionada a la ansiedad. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue validar el uso empírico de Crataegus monogyna para tratar la ansiedad. Para lograrlo, se obtuvo tejido callogénico in vitro a partir de semillas, con el uso de distintas concentraciones de dos reguladores del crecimiento: cinetina (KIN) y ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), determinando la cantidad de fenoles y flavonoides que produce el callo y hojas de la planta completa, mediante la extracción con tres solventes: agua (A), etanol (E) y etanol:agua (EA). Finalmente se evaluó el efecto in vivo de uno de los extractos con mayor contenido de fenoles, alta cantidad de flavonoides y mejor rendimiento de extracción, sobre la conducta de ansiedad en el pez modelo Danio rerio. Al exponer las semillas de C. monogyna a 1.8 % (p/v) de hipoclorito de sodio, se obtuvo una desinfección del 100% sin inhibir su germinación, alcanzándola en su totalidad en 60 d. Al exponer las semillas desinfectadas a 2 mg/L de 2,4-D durante 90 d, se indujo callo friable, con alta tasa de divisibilidad y producción de MtSc, fenoles (A: 11.20±0.16 mgEAG/g) y flavonoides (E: 2.37±0.02 mgEQ/g). Por su parte, se determinó que las hojas de la planta completa contienen significativamente mayor concentración de fenoles (EA: 78.43±0.89 mgEAG/g) y flavonoides (E: 9.5±0.08 mgEQ/g). Para evaluar el efecto in vivo de los extractos sobre la conducta de Danio rerio se utilizó el extracto EA de las hojas de la planta completa (100, 250 y 500 µg/mL), como control positivo se utilizó el diazepam (0.16 µg/mL), fármaco síntético ampliamente utilizado por sus propiedades ansiolíticas, mientras que como control negativo se utilizó agua. No se encontraron diferencias en la conducta del pez para ninguna de las concentraciones de los extractos y los controles. Lo anterior puede deberse a la alta variabilidad de las conductas expresadas por los peces; sin embargo, se observa una tendencia en el efecto de los extractos sobre la conducta a lo largo del tiempo. Los resultados se discuten en relación con las repercusiones que este tipo de extractos pueden tener como un tratamiento alternativo para la ansiedad en humanos.