CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y CULTIVO in vitro DE YOLOXÓCHITL (Magnolia mexicana DC.)

Abstract

La Magnolia mexicana, es una especie de importancia ecológica, medicinal e histórica, amenazada de extinción de acuerdo con la NOM-059-SEMARNAT-2010, debido a la pérdida de su hábitat, la tala clandestina y la dificultad reportada para propagarla por semilla; sumado a esto, la reciente reclasificación a nuevas especies a partir de lo que se consideraba una sola, ha significado la reducción de su área de distribución a Veracruz, Oaxaca y Puebla, con interrogantes a los límites de su distribución debido a la presencia de ejemplares posiblemente de la misma especie en el Estado de México, que tendrían relación además por sus antecedentes históricos. Así, a fin de ayudar a dar claridad sobre los alcances de su ámbito de ocurrencia, y contribuir a la resolución de sus problemas de propagación, este estudio tuvo como objetivos: 1) establecer las relaciones moleculares existentes entre dos individuos de Magnolia sp. presentes en Malinalco y Zumpahuacán, Estado de México, con individuos de poblaciones de M. mexicana en Zongolica, Veracruz con el empleo de RAPDs; y 2) probar diferentes explantes y medios de cultivo para la propagación in vitro de la especie. En el análisis molecular se utilizó el método CTAB para la extracción de ADN, que se amplificó mediante PCR con 14 cebadores RAPD; las relaciones moleculares entre las muestras se evaluaron estadísticamente con el método de agrupación Neighbour Joining, índice de similitud Dice y remuestreo de 1,000 corridas, esta metodología permitió discriminar entre las muestras de Magnolia spp. analizadas, con un PIC promedio de 0.30 que lo catalogaría como altamente informativo, con los cebadores OPA7, OPA8 y E18 con la mayor capacidad discriminante; las evidencias moleculares, contrastadas con datos morfológicos permitieron determinar que los ejemplares de Yoloxóchitl de Veracruz, Zumpahuacán y Malinalco, pertenecen al género Magnolia sección Talauma; pero no fueron suficientes para asegurar que se tratara de la misma especie. En cuanto al cultivo in vitro se probaron siete diferentes métodos de desinfección en yemas axilares, se evaluó la efectividad de agentes inhibidores de fenoles (AIF), y la respuesta de yemas axilares a cuatro diferentes medios de cultivo, y se analizó la respuesta de distintos tejidos (vegetativos, florales y seminales) a diferentes combinaciones hormonales. Así, se encontró que el tratamiento con NaClO 20% (v/v), plata ionizada y 5 g/l de Terbinafina logró controlar la contaminación del 76% de explantes (p ˂ 0.05); sin embargo, no se logró determinar un AIF adecuado para tratar los explantes de M. mexicana en cultivo in vitro. También, se observó que una concentración de 0.5 mg/l de bencilaminopurina (BAP) en medio Murashigue-Skoog (MS) fue suficiente para la formación de brotes a partir de yemas axilares de Yoloxóchitl y la presencia de ádico naftalén acético (ANA) en el medio de cultivo a una concentración de 0.25 g/l promovió la formación de callo en este mismo tipo de explante; de la misma forma, la auxina sintética 2.4-D a una concentración de 3 mg/l adicionada con 1 mg/l de BAP, mostró ser útil en la inducción de callo en distintos tipos de explantes. Con este estudio, se dan avances hacia la creación de un protocolo para la micropropagación de M. mexicana, y queda abierta la posibilidad de que las magnolias de Malinalco y Zumpahuacán sean especies diferentes a M. mexicana.