Desarrollo y caracterización de un sistema auto-nanoemulsionante de liberación de siRNA

Abstract

La terapia génica es una tecnología reciente enfocada en el tratamiento de diferentes tipos de cáncer, enfermedades causadas por defectos y anomalías genéticas o para enfermedades emergentes (p.ej. COVID-19). Su funcionamiento se basa en diferentes mecanismos que permiten reemplazar, modificar, aumentar o suprimir un gen diana. Particularmente, la supresión de genes a través de RNAs no codificantes sintéticos como el RNA pequeño de interferencia (siRNA) ha tomado gran relevancia en los últimos años. Este, participa en la regulación negativa de genes con alta especificidad, gracias a que interacciona con reguladores citoplasmáticos como RISC que impiden que el RNA mensajero (mRNA) diana sea traducido a proteína. El éxito de esta terapia basada en siRNA, requiere el desarrollo de sistemas de entrega (nanoacarreadores) que sean biocompatibles, biodegradables, no tóxicos y que al mismo tiempo eviten la degradación enzimática y/o tengan actividad inmunogénica. En el presente trabajo se propuso un nuevo sistema de entrega de siRNA diseñado para una vía de administración y liberación oral. Este nanoacarreador denominado sistema auto-nanoemulsionante de liberación de fármacos (SNEDDS) se compone de lípidos, cosolventes y surfactantes (HBL >12). Se caracteriza por formar espontáneamente en el tracto gastrointestinal nanoemulsiones aceite en agua (o/w) con tamaños de gota menores a 100 nm. Para el desarrollo de este SNEDDS, primero se seleccionó un sistema complejante para incorporar el siRNA a la fase oleosa del SNEDDS. Posteriormente, se realizó un cribado de excipientes para seleccionar un lípido, un surfactante y un cosolvente para la formulación de la fase oleosa y, una vez formada esta fase se determinó su concentración en medio acuoso. Se optimizó el SNEDDS mediante un diseño de mezclas D-optimal con el software Design-Expert 11, en donde se evaluaron variables independientes asignadas a cada excipiente (lípido, surfactante y cosolvente) y unas variables dependientes asignadas al tamaño de gota, índice de polidispersión (PDI), potencial zeta y hemocompatibilidad. Por último, el SNEDDS optimizado se caracterizó fisicoquímicamente mediante métodos espectroscópicos y espectrométricos y, se evaluó su estabilidad termodinámica para comprobar su utilidad como sistema de transporte del siRNA.