DETERMINACIÓN DE NIVELES SÉRICOS DE I-CAM Y V-CAM EN MUESTRAS DE PACIENTES Y VALIDACIÓN DEL PROCESO MEDIANTE ELISA SÁNDWICH

Abstract

Antecedentes: ICAM-1 y VCAM-1 pertenecen a un grupo de proteínas de tipo inmunoglobulina y se expresan sobre las células del endotelio vascular. La expresión de ICAMs es inducible e incrementa durante la activación celular, así el endotelio inflamado se caracteriza por un incremento en la expresión de ICAM-1 y de VCAM.1. El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) utiliza una enzima como marcador para medir la formación de complejos antígeno-anticuerpo. El marcador enzimático que se emplea en estos análisis se conjuga con un ligando, que puede ser un antígeno, un anticuerpo específico para el antígeno de interés o un anticuerpo para el anticuerpo primario. La validación es la confirmación, mediante evidencia objetiva, de que se cumplen los requisitos de un método para la utilización o aplicación específica prevista. Objetivo: Determinar los niveles de moléculas de adhesión molecular I-CAM-1 y V-CAM-1 en pacientes; y realizar la validación del proceso mediante la técnica de ELISA Sándwich. Materiales y Métodos: Elaborar una curva de calibración para ICAM-1 y VCAM-1, medir muestras de pacientes aleatorios y determinar la muestra más alta, la cual será utilizada para realizar la validación, se llevan a cabo las pruebas de linealidad, repetibilidad y reproducibilidad. Resultados: Para la prueba de linealidad se obtuvieron los siguientes resultados: 1) VCAM-1 se obtuvo una r2= 0.99 dentro del intervalo 193 ng /mL a 1550.808 ng /mL, con un % de recobro entre 93-100 % 2) ICAM-1 se obtuvo una r2= 0.99, dentro del intervalo 160.173 ng /mL a 1256.808 ng /mL con un % de recobro entre 93-102 %. Para la prueba de repetibilidad 1) VCAM-1 se obtuvo un coeficiente de variación de 0.66 % - 2.73 %. 2) ICAM-1 se obtuvo un coeficiente de variación de 2.29 % - 4.86 %. En la prueba de reproducibilidad para 1) VCAM-1 se obtuvo un coeficiente de variación de 2.27 %, 2) ICAM-1 se obtuvo un coeficiente de variación de 3.90 %. Todas las pruebas son satisfactorias en ambos casos. Conclusiones: Dentro de los intervalos obtenidos en las pruebas de linealidad el método se comporta de manera lineal. De acuerdo con los resultados de repetibilidad y reproducibilidad podemos afirmar que el método es preciso. Dado el porcentaje de recuperación o recobro obtenido, podemos afirmar que el método es exacto. Los resultados obtenidos respecto a linealidad, precisión y exactitud, la técnica de Elisa Sándwich es adecuada para determinación de niveles séricos de ICAM-1 y VCAM-1.