Análisis de la filogenia y los mecanismos de resistencia de Salmonella spp. en el estado de México

Abstract

La resistencia a los antimicrobianos y su incremento a nivel mundial, se ha estudiado en algunos países y es impulsada por muchos factores interrelacionados; por lo tanto, las intervenciones únicas y aisladas surten poco efecto. En México, la contaminación bacteriana, se da en algún eslabón de la cadena de producción y procesamiento de alimentos, siendo la bacteria Salmonella spp., una de las principales causas de infecciones en animales y humanos. El objetivo de la presente investigación fue evaluar las mutaciones del gen gyrA, fuera y dentro de la región QRDR de Salmonella spp., aislados de canales porcinos, provenientes de rastros del estado de México, con el fin de identificar nuevos mecanismos moleculares de resistencia. Para este trabajo se analizaron un total de 86 aislados de Salmonella spp., todos fueron confirmados por pruebas bioquímicas y serotipificación (antígenos somáticos y flagelar). El análisis de las muestras se hizo con los protocolos recomendados en la norma ISO 6579:2002. Se llevó a cabo un ensayo con la técnica Kirby-Bauer para determinar la sensibilidad de estos aislados a los antimicrobianos: ampicilina (10 miligramo, mg), amikacina (30 mg), carbenicilina, (100 mg), cefalotina (3 mg), cefotaxima (30 mg), ceftriaxona (30 mg), cloranfenicol (30 mg), gentamicina (10 mg), netilmicina(30 mg), nitrofurantoína (300 mg), pefloxacina (5 mg), trimetoprim sulfametoxazol; para las quinolonas se utilizaron discos individuales de ácido nalidíxico (5 mg), ciprofloxacina (5 mg), norfloxacina (10 mg) yofloxacina (5 mg). Se aisló y amplificó el gen gyrA, enviándolo a secuenciar para identificar mutaciones en la región QRDR y fuera de esta, y determinar la relación de la presencia de mutaciones con la resistencia. Los análisis filogenéticos y evolutivos moleculares se llevaron a cabo utilizando la versión MEGA 5.2. Las secuencias utilizadas en el análisis se obtuvieron de las muestras colectadas y se analizaron con el EMBL-BL y fueron alineadas utilizando el programa Clustal W1.4. Se obtuvo un árbol filogenético con 7 cepas, donde tres fueron clasificadas como S. Typhimurium, S. Barcilly y S. Enteritidis S. Newports; las otras nueve muestras fueron clasificadas como S. Typhimurium según pruebas bioquímicas, encontrándose mutaciones dentro de la región QRDR en S83F, D87N y D87G. En este análisis también se encontró una mutacion fuera de la región QRDR en el aislado de S. Newporten L582G. Se concluye que las mutaciones más frecuentes dentro de la región QRDR son S83F y S83Y coincidiendo con otros autores. Esto influyó en la resitencia a quinolonas de Salmonella spp., sugiriendo que otros mecanismos moleculares pueden influir en esta resistencia debido a la mutación encontrada fuera de esta región.