Preparación y caracterización de un sistema específico de liberación de fármacos basado de lipoproteínas de alta densidad (rHDLc) radiomarcadas con 99mTc

Abstract

El uso de Lipoproteínas de alta densidad como sistemas acarreadores de fármacos, ha permitido el transporte de fármacos poco solubles tales como 5-fluorouracilo, doxorrubicina, paclitaxel, entre otros. Además, otras moléculas pueden conjugarse en la superficie de las partículas lipoproteicas de colesterol de alta densidad (HDLc) ya sea por conjugación o mediante la formación de complejos con proteínas o los grupos fosfato de los fosfolípidos. Las partículas HDL in vitro y en modelos de tumor, son captadas por células que expresan receptores del tipo SR-B1; permitiendo el estudio del mapeo de descarga del contenido a las células, y, por lo tanto, teniendo una terapia celular más específica. El 99mTc ha sido utilizado en la generación de Tomografías Computarizadas de Emisión de Fotón Único. El objetivo del trabajo consistió en desarrollar un sistema radiomarcado (99mTc) de transporte específico de fármacos basado en el uso de lipoproteínas de alta densidad reconstituidas (rHDLc), utilizando la Apolipoproteína A1 (Apo-A1) como ligante de direccionamiento al receptor scavenger clase B, tipo I (SR-B1). La estrategia seguida consistió inicialmente en la modificación de la molécula del colesterol a un derivado tiolado, posteriormente se conjugó un derivado del ácido hidrazinonicotínico (HYNIC) mediante un enlace tioéster, obteniendo el derivado colesterol-HYNIC (Col-HYNIC). Las lipoproteínas (HDLr) fueron ensambladas con una mezcla de fosfatidilcolina (EYPC), colesterol libre, éster de colesterol, colesterol modificado con HYNIC, Apo-A1 y colato de sodio. El tamaño de las lipoproteínas se determinó mediante Dispersión de Luz Dinámica (DLS) y se caracterizaron fisicoquímicamente. Posteriormente fueron radiomarcadas con 99mTc y administradas en un modelo murino vía intravenosa para determinar su biodistribución, se determinó la radiactividad por órgano a las 0.5,1, 3 y 24 horas, a partir de estos datos se construyó el modelo farmacocinético de las lipoproteínas radiomarcadas. Las modificaciones en la molécula del colesterol (Col-HYNIC) fueron confirmados por Cromatografía en capa fina (ITLC), y por Infrarrojo medio. Además, la conversión a los dos primeros intermediarios (derivado bromado y derivado tiolado) fueron también analizados por espectrometría de masas, los iones comunes se encontraron cerca de 450 m/z y 476 m/z respectivamente. El tamaño de las lipoproteínas fue en un rango de 20.69 ± 13.99 nm; se comprobó y midió el radiomarcado por cromatografía en capa fina, determinando una pureza radioquímica superior al 95 %. Los estudios de biodistribución en un modelo murino mostraron una eliminación principalmente bifásica (una fase rápida y una fase lenta). Los principales órganos de almacenamiento de las rHDL fueron el hígado, bazo y riñones. Se desarrolló un sistema específico de Lipoproteínas rHDLc marcado con 99mTc, adicionalmente la modificación del colesterol a su derivado tiolado permite una mayor posibilidad de conjugaciones o funcionalización con otras biomoléculas. Las lipoproteínas HDL marcadas con 99mTc conteniendo Apo-A1 demostraron tener preferencia de almacenamiento en el hígado, bazo y riñones; órganos donde las células expresan los receptores SR-B1.