Validación del método de inmunoensayo enzimático EMIT para la identificación de drogas de abuso (benzodiacepinas, tetrahidrocanabinol, anfetamina y cocaína) en sangre.

Abstract

Dentro del ámbito forense se han buscado técnicas alternativas a los métodos cromatográficos y espectroscópicos tradicionales para realizar el tamizaje de drogas de abuso en matrices biológicas. Las técnicas que se han seleccionado preferentemente son las pruebas inmunoenzimáticas, que demuestran tener buena sensibilidad, son rápidas, fáciles de realizar, los reactivos que emplean presentan vida media prolongada y son económicos. Algunas de estas técnicas, han sido desarrolladas para el análisis en orina, lo cual genera inconvenientes para el examen toxicológico post-mortem, ya que en su mayoría se obtiene muestra sanguínea. Estas circunstancias han llevado a adaptar los métodos de inmunoensayo, que fueron diseñados principalmente para determinaciones de drogas en orina, a la detección de drogas en otros fluidos y tejidos corporales. El objetivo de esta investigación fue adecuar y validar el inmunoensayo EMIT, desarrollado para la identificación de drogas de abuso (tetrahidrocannabinol, cocaína, benzodiacepinas y anfetamina) en orina, para usarlo en muestras de sangre post-mortem, determinando los parámetros establecidos por las “Directrices para la validación de métodos analíticos y la calibración del equipo utilizado para el análisis de drogas ilícitas en materiales incautados y especímenes biológicos de la Oficina de las Naciones Unidas Contra la Droga y el Delito” (ONUDC). Se realizaron los estudios en muestras sanguíneas que de acuerdo con su historial se encuentran libres de las drogas de interés. Para la determinación de cada parámetro de validación se fortificó la muestra por un periodo de 24 horas en refrigeración, con una solución de la droga de interés de concentración conocida, se obtuvo plasma y se analizó en el equipo EMIT. Los resultados muestran que el método presenta buena selectividad, ya que no se encuentran sustancias que alteren los resultados. Con un límite de detección confiable establecido por el equipo. El método presenta buena repetibilidad y reproducibilidad ya que los valores medidos entre el día 1 y día 2 no presentan diferencias significativas y el Coeficiente de Variación (CV) es menor al 20%. Se evaluó la estabilidad de la muestra, obteniendo que para THC (tetrahidrocannabinol) y benzodiacepinas existe buena estabilidad en un periodo de 7 días en condiciones de refrigeración, mientras que para cocaína y anfetaminas su estabilidad es menor ya que el incremento de variabilidad de resultados se percibe a partir del día 2. En general se cumplen con las directrices establecidas por la UNODC, por lo que se establece que el método de inmunoensayo EMIT es viable para analizar muestras de sangre como alternativa a las muestras de orina.