El ácido fólico reconoce específicamente al receptor folato (RF) sobreexpresado en carcinomas. Los radiofármacos de folato tienen afinidad por RF pero alta captación renal. La secuencia Gly-Gly-Cys mejora la eliminación renal. El objetivo fue sintetizar el 99mTc-EDDA/HYNIC-Gly-Gly-Cys(α,γ)-Folato y evaluar su potencial in vitro e in vivo para reconocer RF. El conjugado se caracterizó químicamente (UV-Vis, FT- IR , MALDI-TOF) y se radiomarcó con 99mTc . La afinidad in vitro y la biodistribución se evaluaron en células T47D (FR+) y en ratones atímicos con tumores inducidos. 99mTc-EDDA/HYNICGly-Gly-Cys(α,γ)-Folato mostró alta pureza radioquímica (> 94 %) , afinidad por los RF (IC50=0.3nM), rápida eliminación sanguínea, captación tumoral adecuada (2.4 % ID/g a 2h) , y retención renal baja (1.6 % ID/g a 24 h). 99mTc-EDDA/HYNICGly-Gly-Cys(α,γ)-Folato es útil como un agente de imagen para reconocer RF.