Evaluación in vitro de la apoptosis de neutrófilos de vacas lecheras inducida por los tipos capsulares 5 y 8 de Staphylococcus aureus

Abstract

Staphylococcus aureus es el principal patógeno causante de la mastitis bovina, la infección de la glándula mamaria por esta bacteria, se acentúa por los factores de virulencia; destacando el exopolisacarido capsular del que predominan los serotipos CP5 y CP8 en la infección mamaria. Los neutrófilos (PMN) en la glándula mamaria, constituye la primera barrera de defensa celular en la resistencia a la infección intraglandular mamaria. Para evaluar el efecto de los serotipos capsulares CP5 y CP8 de S. aureus sobre la fagocitosis y apoptosis in vitro de neutrófilos de bovinos lecheros, se utilizaron neutrófilos de sangre de vacas lecheras concentrados por el método de lisis hipotónica de eritrocitos LHE. El ensayo in vitro de de fagocitosis se realizó por triplicado, con una suspensión de bacterias de 2 x 108 CFU/mL., conjugada con fluoresceína para cada serotipo capsular y el tipo compacto. A partir de los ensayos, se determinó la capacidad de fagocitosis de neutrófilos (CFN) e índice de fagocitosis de neutrófilos (IFN) observados en el microscopio de epifluorescencia UV. La apoptosis se evaluó mediante el método de microscopia de fondo claro teñido con May Grünwald-Giemsa y por epifluorescencia de acuerdo a las características morfológicas observadas en las células. Los resultados obtenidos para CFN fueron: Cepa compacta (CC) 86.50±0.31, Cepa capsular 5 (CP5) 74.98±2.44 y Cepa capsular 8(CP8) 82.22±1.50. El IFN obtenidos por la técnica de microscopia de fondo claro para los diferentes grupos fueron: CC 6.13±2.93, CP5 4.88±0.13, CP8 5.22±0.10. Los valores de IFN por la técnica de epifluorescencia fueron: CC 7.62±0.55, CP5 4.67±0.29 y CP8 5.53±0.40. En ambas técnicas el IFN muestra diferencias entre los tratamientos y el grupo control (p<0.05). Los valores obtenidos de la inducción de apoptosis por la técnica de microscopia de campo claro fueron: Control positivo C(+) 97.7±1.28, Control negativo C(-) 27.13±1.85 CC 35.44±2.56, CP5 60.07±4.21, CP8 45.57±4.34. El porcentaje de inducción de apoptosis para la técnica de epifluorescencia empleando Bromuro de Etidio y Naranja de Acridina fueron: C(+) 95.61±2.66, C(-) 20.2±1.77, CC 26.50±1.65, CP5 52.78±3.29, CP8 41.33±2.32. Al evaluar el porcentaje de inducción de la apoptosis mediante la detección de fosfatidilserina se obtuvieron los siguientes valores: C(+) 94.63±1.68, C(-) 19.17±1.81, CC 28.87±2.82, CP5 54.80±3.15 y CP8 46.17±2.17. En ambas técnicas se observaron diferencias (p<0.05) entre los tratamientos y los grupos controles. Así mismo el serotipo CP5 indujo mayor porcentaje de apoptosis y fue fagocitado en menor proporción que CP8 y CC. Los resultados indicas que la cepa CP5 posiblemente sea más virulenta. Existen diferencias en la actividad de fagocitosis in vitro entre los tipos capsulares 5 y 8 y en su capacidad para inducir apoptosis de neutrófilos bovinos.