IDENTIFICACIÓN DEL FENOTIPO y GENOTIPO CAPSULAR 5 y 8 DE Staphylococcus aureus Y SU CAPACIDAD DE SOBREVIVENCIA INTRACELULAR EN NEUTRÓFILOS DE VACAS LECHERAS.

Abstract

El Staphylococcus aureus es un patógeno causante de mastitis bovina, enfermedad infecciosa que afecta la producción de leche y su inocuidad de la misma al alterar los componentes físico-químicos y bacteriológicos, comprometiendo el bienestar animal. Debido a sus factores de virulencia que favorecen el desarrollo de la infección en la glándula mamaria y la severidad de la mastitis. El polisacárido capsular serotipos 5 y 8, contribuye a la persistencia de la infección glandular. Para determinar la presencia de los serotipos capsulares 5 y 8, la sobrevivencia intracelular in vitro en neutrófilos obtenidos de vacas lecheras. Se obtuvieron de una unidad de producción lechera, 116 muestras de leche de 29 vacas en línea de ordeño. El aislamiento e identificación de S. aureus, mediante un procedimiento de rutina bacteriológica. La expresión de cápsula se obtuvo en agar Columbia adicionado con NaCl al 2.0% p/v; la cápsula se identificó mediante tinción de Hiss. El tipo capsular se determinó en tubos de agar blando suplementado con suero de leche al 10% v/v. La identificación fenotípica de los serotipos capsulares 5 y 8 se llevo a cabo mediante la prueba de seroaglutinación en placa, con un antisuero policlonal de conejo. La expresión de los genes Cap5 y Cap8 en los aislamientos de S.aureus se confirmó mediante los productos de amplificación del PCR. La obtención de neutrófilos se realizó mediante la técnica de lisis hipotónica de eritrocitos. Se efectuó el ensayo de fagocitosis in vitro y sobrevivencia intracelular sobre placas de agar TSA y bajo el microscopio de epifluorescencia. Se obtuvo el 28.44% (33/116) de positividad a S. aureus. El 88.0% de las cepas aisladas expresaron cápsula el resto fue negativo, se corroboró por tinción de Hiss. El 88.0% expresaron el tipo capsular difuso y solo 12.0% el tipo compacto. En la prueba de seroaglutinación, el 6.0% correspondieron al serotipo capsular 5, 6.0% al serotipo capsular 8 y el 75.75% fueron tipificables a los serotipos 5/8 mostrando reacción cruzada (Serotipo capsular 336), 12.12 fueron NT, por el método (p>0.05). Los serotipos capsulares 5 y 8 se corroboraron por la técnica de PCR, para los serotipos donde los NT mostraron características para el serotipo 5 y 8 aumentando a 88% correspondió a un nuevo serotipo capsular 336. Se obtuvo una viabilidad de PMNs 2.7x106 , esta cantidad de ajustó a una concentración de 1.4x106 para el ensayo de fagocitosis y sobrevivencia intracelular en placa la frecuencia de distribución en la sobrevivencia fue amplia de 8.6 a 30.6, Los serotipos NT connsiderados 5 y 8 (336 ) tuvieron la mayor frecuencia y la menor frecuencia observó en el serotipo capsular 8. El total de bacterias fagocitadas por los serotipos capsulares 5, 8, 5 y 8; correspondieron a 1007, 664 y 762 respectivamente. El índice total de fagocitosis para los serotipos capsulares fue el siguiente: 41.38%, (5), 26.42% (8) y 31.31 (5 y 8).]. La identificación de los serotipos capsulares 5 y 8 de S. aureus y los resultados de sobrevivencia intracelular indican que tienen importancia clínica en la persistencia de infección de la glándula mamaria en las vacas además de constituir un riesgo importante a la salud pública.