ESTUDIO DEL GEN DE LA PIRUVATO: FERREDOXIN ÓXIDOREDUCTASA EN AISLADOS HUMANOS DE Blastocystis spp

Abstract

Blastocystis spp. es un parásito intestinal que presenta la mayor prevalencia en los exámenescoproparasitoscópicos; su amplia diversidad morfológica y genética permite identificar diferentesestadios morfológicos y al menos 17 linajes ribosomales conocidos como subtipos (ST), basadosen su identificación por el gen 18S rDNA. Se ha argumentado que el gen 18S rDNA podría no serel marcador de elección para discriminar entre cepas de un mismo ST debido a su ampliopolimorfismo intragenómico. Se ha propuesto que la patogenicidad pudiera ser dependiente del ST,esto y características de la biología del parásito por confirmar han causado incertidumbre paraestablecer sin duda su papel como patógeno. Por otro lado, la piruvato: ferredoxin óxidoreductasa(PFOR) es una enzima conservada que se ha identificado en el MLO de Blastocystis; su papelcentral en la obtención de energía para este y otros organismos anaerobios la hace un blancoprometedor para identificar cepas de este parásito. Objetivo: Evaluar la diversidad genética delgen PFOR en aislados de Blastocystis de niños sintomáticos. Método: Se analizaron 192 muestrasde materia fecal de niños residentes del Estado de México, que presentaban síntomas de diarreay/o dolor abdominal. Los exámenes coproparasitoscópicos revelaron a Blastocystis spp. comoúnico parásito en 21 muestras, las que fueron analizadas por PCR para las regiones de interés delgen 18S rDNA y el gen PFOR. Se obtuvieron las secuencias de los amplicones y se analizaronpara determinar la variabilidad genética de la región de interés para el gen PFOR. Resultados: Elanálisis del gen 18S rDNA mostró que el subtipo ST3 de Blastocystis fue el más frecuente (43%),seguido del ST1 (38%), ST2 (14%) y ST7 (5%). Además, se encontró en dos muestras coinfeccióncon los ST1 y ST2 (10%). La reconstrucción filogenética por inferencia Bayesiana mostró que lassecuencias del gen PFOR se agruparon en tres clústeres, dos de ellos contienen secuencias dediferentes subtipos y solo un clúster agrupó secuencias del subtipo ST3. Los valores de ladiversidad nucleotídica () y el polimorfismo de haplotipo () del análisis del gen 18S rDNA fueronsimilares entre ST1 y ST2 (~0.025 y ~0.03@). Interesantemente, los valores y para elsubtipo ST3 fueron aproximadamente 10 veces más bajos (~0.004 y ~0.005). Para el gen PFORuna tendencia similar fue encontrada; los clústeres I y II tuvieron valores de ( ~0.05 y ~0.05),mientras que para el clúster III se encontró valores seis veces más bajos (~0.008 y ~0.009).Conclusiones: Aunque el marcador PFOR no permitió diferenciar a Blastocystis en subtipos, seencontró una baja variabilidad genética para las muestras del subtipo ST3 usando los marcadoresPFOR y 18S rDNA, lo que sugiere un panorama epidemiológico particular que lo distingue de losotros subtipos.